首先就是典型的临床表现，还有结合之前有过烟酸缺乏的病史，临床还有对治疗的反应等等这些都是烟酸缺乏症，在确定诊断的时候所注意的方面，做24小时n端甲基烟酰胺排出量以每千克肌酐计算，少于44.2微摩尔或0.5毫克的时候，就可以考虑疾病了。
实验室检查可见有不同程度和类型的贫血，大细胞性贫血可能和叶酸缺乏有关系，血浆色氨酸和红细胞nad和dp水平低下，正常情况下，成人排出烟酸的代谢物当中20%到30的都是n端甲基烟酰胺，40%到60的是吡呤酮，所以说如果n端甲基烟酰胺太少的话，可能也是提示烟酸缺乏症的情况。
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